Í líffræðilegum rannsóknum eru fjölpeptíð með langa röð venjulega notuð.Fyrir peptíð með meira en 60 amínósýrur í röðinni er genatjáning og SDS-PAGE almennt notuð til að fá þau.Hins vegar tekur þessi aðferð langan tíma og endanleg vöruaðskilnaðaráhrif eru ekki góð.
Áskoranir og lausnir fyrir langa peptíðmyndun
Við myndun á löngum peptíðum stöndum við alltaf frammi fyrir vandamáli, það er að sterísk hindrun þéttingarhvarfsins eykst með aukningu á röðinni í mynduninni og viðbragðstímann þarf að breyta til að gera hvarfið lokið.Hins vegar, því lengri viðbragðstími, því fleiri aukaverkanir myndast og hluti af markpeptíðinu myndast.Slíkar leifar - skortur peptíðkeðjur eru lykilóhreinindi sem framleidd eru í langri peptíðmyndun.Þess vegna, við myndun langs peptíðs, er lykilvandamálið sem við verðum að sigrast á að kanna hágæða hvarfskilyrði og hvarfaðferðir, til að gera amínósýruþéttingarviðbrögðin umfangsmeiri og fullari.Að auki, minnka viðbragðstímann, því því lengri viðbragðstíminn, því óviðráðanlegri hliðarviðbrögð, því flóknari eru aukaafurðirnar.Þess vegna eru eftirfarandi þrjú atriði tekin saman:
Hægt er að nota örbylgjuofnmyndun: Fyrir sumar amínósýrur sem koma fram í nýmyndunarferlinu sem ekki er auðvelt að samþætta, er hægt að nota örbylgjuofnmyndun.Þessi aðferð hefur ótrúlegan árangur og dregur verulega úr viðbragðstímanum og dregur úr myndun tveggja lykil aukaafurða.
Hægt er að nota brotamyndunaraðferð: Þegar erfitt er að búa til sum peptíð með algengum nýmyndunaraðferðum og ekki auðvelt að hreinsa þau, getum við tekið upp alla þéttingu nokkurra amínósýra í ákveðnum hluta peptíðsins í peptíðkeðjuna í heild.Þessi aðferð getur einnig leyst mörg vandamál í myndun.
Hægt er að nota asýlhýdrazíð nýmyndun: asýlhýdrazíð nýmyndun peptíða er aðferð við fastfasa nýmyndun N-enda Cys peptíðs og C-enda fjölpeptíðs hýdrasíðs efnafræðileg sértæk viðbrögð milli myndun amíðtengja til að ná fram peptíðbindingaraðferð.Byggt á stöðu Cys í peptíðkeðjunni skiptir þessi aðferð allri peptíðkeðjunni í margar raðir og myndar þær í sömu röð.Að lokum er markpeptíðið fengið með vökvafasa þéttingarviðbrögðum.Þessi aðferð dregur ekki aðeins verulega úr nýmyndunartíma langs peptíðs heldur eykur hún einnig hreinleika lokaafurðarinnar verulega.
Löng peptíðhreinsun
Sérstaða langra peptíða leiðir óhjákvæmilega til flókinna íhluta óhreinsapeptíða.Þess vegna er það líka áskorun að hreinsa löng peptíð með HPLC.Amyloid röð af fjölpeptíð hreinsun ferli, gleypa mikla reynslu og tókst að nota í hreinsun á löngu peptíð.Með því að taka upp nýjan búnað, blöndun margra hreinsunarkerfa, endurtekinn aðskilnað og aðrar reynsluaðferðir, var árangur af langri peptíðhreinsun verulega bætt.
Pósttími: 18. apríl 2023