Fluorescence resonance energy transfer (FRET)
Fluorescence resonance energy transfer (FRET) er orkuflutningsferli án geislunar þar sem orka örvunarstöðu gjafa er flutt yfir í örvunarstöðu viðtaka í gegnum víxlverkun milli sameinda rafpara.Þetta ferli tekur ekki til ljóseinda og er því ekki geislandi.Þessi prófun hefur þá kosti að vera hröð, viðkvæm og einföld.
Litarefnið sem notað er í FRET prófinu getur verið eins.En í flestum forritum eru í raun notuð mismunandi litarefni.Í stuttu máli er flutningur ljósómunarorku flutningur tveggja tvípóla frá gjafanum (litur 1) til viðtakandans (litarefni 2) þegar gjafahópurinn er spenntur.Almennt séð skarast losunarróf gjafaflúorófórhópsins frásogsróf viðtökuhópsins.„Þegar fjarlægðin milli flúorfóranna tveggja er viðeigandi (10 - 100 A) er hægt að fylgjast með flutningi flúororku frá gjafanum til viðtakandans.Aðferðin við orkuflutning fer eftir efnafræðilegri uppbyggingu viðtakans:
1. Umbreytist í sameinda titring, það er að lýsandi ljós orkuflutnings hverfur.(Viðtakinn er ljósslokkari)
2. Losunin er ákafari en viðtakinn sjálfur, sem leiðir til rauðbreytingar í aukaflúrljómunarrófinu.“(Viðtakar eru ljósgjafar).
Gjafahópurinn (EDANS) og viðtakargenið (DABCYL) eru jafnt tengd náttúrulegu hvarfefni HIV próteasa, og þegar hvarfefnið er ekki aftengt getur DABCYL slökkt á EDANS og síðan orðið ógreinanlegt fyrir flúor.Við aftengd HIV-1 próteasa er EDANS ekki lengur slökkt af DABCYL og EDANS lúsiferasa er síðan hægt að greina.Hægt er að fylgjast með framboði próteasahemla með breytingum á flúrljómunarstyrk EDANS.
FRET peptíð eru þægileg tæki til að rannsaka ósérhæfni peptíðasa.Þar sem hægt er að fylgjast stöðugt með hvarfferli þess, veitir það þægilega aðferð til að greina ensímvirkni.Glansinn sem myndast eftir vatnsrof peptíðtengja af gjafa/viðtaka gefur mælikvarða á ensímvirkni við nanómólstyrk.Þegar FRET peptíðið er ósnortið sýnir það skyndilega hvarf innra flassið, en þegar einhver peptíðtengi á móti gjafa/viðtaka rofnar, gefur það frá sér leiftur, sem hægt er að greina stöðugt og síðan er hægt að mæla ensímvirknina.
Pósttími: 14. ágúst 2023